对制备的单克隆抗体（McAb）进行系统的鉴定主要包括以下几个方面：
1.McAb的Ig类型与亚类的鉴定
小鼠免疫脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合形成的杂交瘤细胞，其分泌的特异性McAb的本质仍是小鼠的不同类型的免疫球蛋白（Ig），其中以IgG最常见，其次为IgM。一般在用酶标或荧光素标记的第二抗体进行筛选时已经基本上确定了抗体的Ig类型。如果用的是荧光素标记的兔抗鼠IgG或IgM，则检测出来的抗体一般是IgG类或IgM类。至于亚类一般则需要用双抗夹心ELISA法来确定。
实验步骤：
- 稀释CBS中的同种型特异性抗体（每个待测样品需要200μL每种稀释的抗体）（IgG1、IgG2b及IgG3在PBS中的稀释比例为1:1000，IgG2a及IgM在CBS中的稀释比为1：5000，兔抗小鼠IgG-HRP的稀释比为1:5000～1:20000）。随后立即在96孔板中加入稀释后的抗体（100μL/孔），然后将96孔板置于4℃孵育过夜或在37℃条件下孵育2h。
- 弃去液体，每孔加300μL洗涤缓冲液，静置1min，弃去洗涤液，并拍干，如此重复洗涤3次。最后一次洗涤后，用干净的吸水纸拍干，以除去残留的洗涤缓冲液。
- 每孔加入300μL封闭缓冲液，在室温下孵育至少1h。
- 按照步骤2重复洗涤3次后，每孔加入100μL待测样品，在室温下孵育1h。
- 按照步骤2重复洗涤3次后，在稀释缓冲液中稀释。每孔加入100μL过氧化物酶标记的检测抗体，将板在室温下孵育1h。
- 按照步骤2重复洗涤3次后，每孔加入200μL底物溶液，在室温下避光孵育10～15min。
- 每孔加入50μL终止液，轻轻击打板，使其充分混合。
- 15min内，在酶标仪450nm波长处测定各孔的OD值。
2.McAb特异性鉴定
除用免疫原（抗原）进行抗原的检测外，还应该用与其抗原成分相关的其他抗原进行交叉试验，其目的是为了判断McAb是否与其他抗原有交叉反应。可用的方法有：ELISA法、免疫荧光法、免疫印迹技术等。
实验步骤——ELISA法：
- 以McAb腹水包被酶标板后，4℃过夜。
- 用1% PBS-吐温（BSA-PBST）于37℃封闭1h。
- 加入预先与AFP共同温育（37℃，1h）的McAb混合物，在37℃条件下孵育1h，洗涤。
- 加入酶标记多克隆抗AFP结合物，37℃孵育1h。
- 洗涤后，底物显色10～20min。
- 加入终止液，终止反应。
- 在酶标仪450nm波长处测定各孔OD值。
3.杂交瘤细胞染色体检查
- 正常鼠的脾细胞染色体数：40，全部为端着丝粒。
- 小鼠骨髓瘤细胞染色体：SP2/0细胞为62—68；NS-1为54～64，大多数为非整倍性，有中部和亚中部着丝点。
- 杂交瘤细胞的染色体数目接近两亲本细胞染色体数目的总和，在结构上多数为端着丝粒染色体外，还应出现少数标志染色体。染色体数目多且较集中的杂交瘤细胞分泌高效价的抗体。
- 检测方法通常采用秋水仙素裂解法：
实验步骤：
- 在已克隆化培养的杂交瘤细胞中加入终浓度为0.4μg/mL的秋水仙素继续培养。
- 按常规法低渗处理和固定，冰水滴片，空气干燥，Giemsa染色。
- 干燥后封片。
- 计算染色体众数。
- 在已克隆化培养的杂交瘤细胞中加入终浓度为0.4μg/mL的秋水仙素继续培养。
- 按常规法低渗处理和固定，冰水滴片，空气干燥，Giemsa染色。
- 干燥后封片。
4.杂交瘤细胞培养上清及腹水效价测定
- 可采用凝集反应、ELISA或放射免疫测定，不同的测定方法效价不同。例如：间接ELISA法检测阳性杂交瘤细胞，对杂交瘤细胞培养上清或腹水作倍比稀释。当最大稀释倍数的杂交瘤细胞培养上清和单克隆抗体的腹水上清的OD值/阴性OD值＞2.1时，为杂交瘤细胞培养上清和单克隆抗体腹水上清的最高效价。
- 实验步骤详见–单抗制备步骤及注意事项——筛选分泌抗体的杂交瘤细胞。
必要时还可以测定单抗的亲和力和识别抗原表位的能力。