单克隆抗体,你可能已经了解关于它的诸多信息,也可能在研究中经常使用。1975年,Kohler和Milstein开创了经典的杂交瘤技术,生产单抗。用您需要产生抗体的物质(抗原)免疫小鼠,然后获取小鼠的脾细胞并与特殊的骨髓瘤细胞融合,使其变成永生化的杂交瘤细胞,可分泌产生抗体。目前,这项技术仍然被用于生产具有精确特异性和无限量的单抗。尽管它有这些吸引人的功能,但用这种方法生产的单抗仍具有一些不可忽视的缺陷。对此,幸运的是,重组抗体的到来改变了原有单抗生产的世界,并克服了相应的缺陷,为什么会这样?请继续阅读吧!
通常,对于研究人员来说,确定哪种抗体适合您的研究是项目启动的第一步。有许多因素需要考虑,包括需要抗体量,抗体的应用和对抗体特异性的要求。单抗和多抗有着各自的优缺点和适用性,在选择时,除了要考虑抗体的应用之外,还要考虑宿主是否适合。
首先,什么是重组抗体?
以编码抗体的基因作为起始材料,利用重组DNA技术,在体外生产的抗体,超出了免疫系统的限制。通过获得抗体的基因序列,构建表达载体,并将其转入至表达宿主中(如酵母、哺乳动物细胞或细菌中)。利用这种方式,生产的抗体是特定种类(IgG/IgA/IgE/IgD/IgM)的抗体。同时,不仅可以生产全长抗体,也可以生产各类抗体片段,如scFv,Fab等。
那么,重组抗体克服了杂交瘤单抗的哪些缺点?
- 时间上:重组抗体只需数周(少至4周);而杂交瘤单抗至少数月(少至4月)
- 成本上:重组抗体经济高效,尤为适合高通量生产抗体;而杂交瘤长期大量生产抗体成本相当昂贵
- 批间差:重组抗体由编码它的基因决定,更可靠,具有高度的批次间一致性;而杂交瘤稳定性差,批次间不具备一致性
- 稳定性:杂交瘤细胞可能会丢失,重新制备耗时耗力。而对于重组抗体来说,你需要的只是一个蛋白表达平台
- 应用上:重组抗体可规避鼠单抗引发的人体免疫反应。即使是人源化的杂交瘤抗体,也会被人体的免疫系统判定是外来的,会引起超敏反应
- 生产能力:重组抗体不仅可以生产全长抗体,也可生产Fab/scFv/sdAb等抗体片段,且易在多种宿主中表达
- 抗体工程:重组抗体可通过抗体工程技术改造,例如提高抗体亲和力,抗体人源化等
- 抗体片段:重组抗体可以以多种形式产生,如Fab片段,scFv单链抗体,sdAb单域抗体等
- 动物福利:重组抗体不需要使用动物,克服了对动物的伦理问题
- 纯化:重组抗体纯化需要的抗原更少
如何开发重组抗体?
对于重组抗体的开发,一般有几种方法:通过噬菌体展示,B细胞克隆及杂交瘤测序。
噬菌体展示技术
噬菌体展示技术是将单链抗体(scFv)或抗原结合片段(Fab)展示于噬菌体表面,并构建数百万甚至数十亿个展示出抗体片段的噬菌体,从而建立起一个抗体文库(Antibody library)。得到一个数以千计的噬菌体文库,每个噬菌体携带不同的抗体,如何才能筛出那个展示你想要抗体的噬菌体呢?这就是通过淘选,经过数轮的“吸附-洗脱-扩增”,最终分离出具有最高亲和力和稳定性的展示抗体的噬菌体。对所选的抗体进行测序,再利用重组技术即可大量生产。j9九游会可以提供重组抗体的生产,详情可与我们联系。
B细胞克隆
通过免疫动物,分离获得浆细胞,使用流式细胞术将它们彼此分离。 筛选分离的细胞以找到产生所需抗体的克隆,并扩增克隆的基因,克隆到表达载体中,通过ELISA筛选表达较好的克隆。 然后进行测序,利用体外重组技术生产抗体。
杂交瘤测序
通过对已有的杂交瘤细胞测序,获得抗体的基因序列,即可利用体外重组技术表达抗体。
一旦开发出重组抗体,即可快速大量生产,并且具有比普通单抗/多抗更好的结合活性。虽然这些开发过程非常复杂,耗时且,但是如果您在长期内需要多次使用(比如IVD抗体开发),你会发现,它具有极大的成本效益,一次开发,终身受益!